一文掌握｜OVCAR-3细胞培养&基因编辑全攻略_风闻

在卵巢癌相关研究领域，**OVCAR-3细胞**堪称“王牌模型”。它因出色模拟临床化疗耐药特性，被广泛应用于肿瘤耐药机制解析、靶向治疗策略开发、免疫逃逸现象研究及多种基因功能探索中。从药物筛选、基因敲除，到信号通路分析与细胞命运追踪，它几乎覆盖了肿瘤科研的全流程，是科研工作者常备的实验“利器”。如果你还没有开始使用OVCAR-3细胞，可能已经与一条通向研究前沿的捷径擦肩而过！今天，小源将带你全面“解锁” OVCAR-3的使用指南：分享实用的培养心得与高效的基因编辑技巧，助你在科研道路上效率倍增，轻松应对各类核心实验！

细胞信息

**细胞名称：**OVCAR-3（人卵巢癌细胞）

**细胞形态：**上皮样，贴壁细胞

**细胞培养条件：**80%RPMI-1640+20%FBS+0.01mg/mL胰岛素

**气相：**空气，95%；二氧化碳，5%

**温度：**37℃

**换液频次：**2-3天/次

**传代比例：**1:2-1:3

细胞生长正常图片：细胞呈不规则上皮样，多为多边形或梭形，会呈现"铺路石样"排列

细胞生长状态差图片：细胞形态异常，如细胞体积变大，扁平化（如下图红框框起来处），细胞可能变得不规则，失去典型的铺路石样外观，出现空泡化等。

细胞复苏

1) 准备：取7mL完全培养基于离心管中备用

2) 解冻：将细胞从干冰里取出，用镊子夹住盖子放入 37℃水浴中快速晃动（注意：水不能没过盖子），使其在1分钟左右完全融化，直至冰块融化至绿豆大小，停止水浴

3) 离心：将解冻后的细胞悬液转移至离心管中，1100rpm条件下离心4分钟，弃去上清液

4) 重悬与接种：用完全培养基重悬细胞，接种于合适大小的培养皿/瓶中

5) 培养：将培养皿/瓶置于37℃培养箱中培养，24小时后观察细胞状态及贴壁情况

细胞传代（以T25瓶为例）

1) 当细胞汇合度达到80%时可进行传代，传代时在超净台内弃去培养瓶里的培养液，加入5mLPBS洗涤细胞1-2次。

2) 加入1mL胰酶，轻轻晃动瓶子并使胰酶完全浸过细胞，将培养瓶放入培养箱孵育 3-4分钟，待在显微镜下观察到大部分细胞变圆变亮，轻轻晃动培养瓶两侧有大部分细胞脱落时，立即终止消化。

3) 加入2倍胰酶体积即2mL完全培养基终止消化，然后转移至15mL离心管中。

4) 1100 rpm 室温离心 4 分钟，离心结束，弃去上清，加入完全培养基重悬细胞。

5) 细胞按照1:2-1:4比例传代，传代第二天观察细胞状态。

细胞冻存

1) 收集细胞：按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中。

2) 离心：1100rpm条件下离心4分钟，去掉上清。

3) 重悬与冻存：用细胞冻存液重悬细胞，按每1mL冻存液含1×10^6个细胞/mL分配到冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。

4) 降温与储存：将冻存管置于程序降温盒中，-80℃冰箱中过夜后转入液氮罐内保存。

OVCAR-3细胞培养****注意事项

1.在培养OVCAR-3细胞时，血清的浓度需精确控制在20%，并需额外补充胰岛素至终浓度0.01 mg/mL，以满足细胞生长需求。

2.胰酶消化过程中需密切关注时间，尽量使细胞解离为单个状态。操作时应避免剧烈吹打，采用轻柔方式处理，以减少机械损伤。

3.建议传代时维持适当的接种密度，每次分瓶比例控制在1:2至1:3之间。待细胞汇合度达到80%至90%时进行传代，有助于维持其良好的生长状态。

4.培养过程中推荐使用品质优良的胎牛血清，以提升细胞活性和实验稳定性。

OVCAR-3细胞转染时注意事项

1.转染前应确保细胞状态良好，并处于对数生长期，此阶段细胞活跃、分裂迅速，能显著提升转染效率。建议细胞密度控制在70%~80%之间。

2.消化细胞时需掌握好酶消化时长，避免因处理过度造成细胞损伤。

3.操作过程中应将细胞充分打散为单细胞悬液，尽量避免出现细胞聚团现象。

4.实验用细胞的存活率应达到80%以上，以保证实验可靠性。

5.若采用电转法进行转染，需严格控制所用细胞数量，并于电转结束后及时将细胞接种于合适类型的培养板中。

6.电转后细胞应具备良好的贴壁能力，贴壁率不低于70%，以确保后续实验顺利进行。

7.使用电转技术时，实验总时长需严格控制，避免电转过程时间过长导致细胞活力下降。

8.电转完成24小时内应及时更换为含高品质胎牛血清的完整培养基，以促进细胞恢复和生长。

9.使用慢病毒载体转染时，应将感染前的细胞密度控制在30%~40%之间，避免过度融合影响感染效率。

10.病毒法正式实验前建议开展预实验，以确定最合适的MOI，同时在感染阶段加入Polybrene助染剂以提高转染效率。

11.对于各类转染试剂，在使用前务必彻底混匀，确保成分分布均匀，以保证实验的一致性和重复性。

OVCAR-3铺单克隆实验注意事项

1. 确保铺克隆实验前细胞状态正常，老化细胞少，建议控制细胞汇合度在70%左右

2. 铺克隆时细胞活率≥80%

3. 可先进行预实验找到合适的铺克隆梯度，避免单克隆占比太低

4. 细胞接种96孔板时需确保细胞分布均匀

5. 稀释细胞计数后结果最好落在1*10^6-2*10^6之间

电转图: