基因敲除EGFR细胞-源井生物_风闻

EGFR是7p12号染色体上的一个基因，它编码表皮生长因子，它是蛋白激酶超家族的跨膜糖蛋白，是表皮生长因子家族成员的受体。蛋白质与配体的结合诱导受体二聚化和酪氨酸自磷酸化并导致细胞增殖。表皮生长因子受体（EGFR）在正常生理和癌症中具有基本作用，使其成为癌症治疗的合理靶标。然而，令人惊讶的是，已经证明靶向是经典的，配体刺激的EGFR信号传导的抑制剂在治疗许多EGFR依赖性癌症中很大程度上无效。最近的证据表明，内源性和治疗诱导的细胞应激均可触发不依赖配体的EGFR转运和信号传导的健壮，非规范性途径，基因敲除技术从而为癌细胞提供生存优势和对治疗的抵抗力。

靶向EGFR外显子17的CRISPR/Cas9系统通过表皮遗传调控UBwt/vIII胶质瘤细胞中的UBXN1消除了NF-κB激活

在全球范围内，胶质母细胞瘤（GBM）是最致命和最常见的颅内肿瘤。尽管进行了数十年的研究，GBM患者的总体生存率仍保持不变。表皮生长因子受体（EGFR）的扩增和基因突变被认为与预后呈负相关。在这项研究中，研究人员使用蛋白质组学确定UBXN1是EGFR突变vIII（EGFRvIII）的负下游调控因子。通过生物信息学分析，研究人员发现UBXN1是可以改善神经胶质瘤患者总体生存时间的因素。研究人员还确定，在存在EGFRvIII的情况下，UBXN1的下调是由H3K27me3的上调介导的。由于UBXN1可以负调节NF-κB，因此研究人员认为EGFRwt / vIII通过抑制UBXN1的表达来激活NF-κB。重要的是，研究人员使用最新的基因组编辑工具CRISPR/Cas9敲除外显子17上的EGFRwt/vIII，并进一步证明UBXN1受EGFRw

t/vIII负调控。此外，EGFR/EGFRvIII的敲除可以在体外和体内使GBM受益，这表明CRISPR/Cas9对EGFR扩增和带有EGFR突变的患者都是一种有前途的治疗策略。

从非小细胞肺癌到小细胞肺癌的转化：分子驱动器和起源细胞

肺癌是全世界癌症死亡的最常见原因。肺癌的两种广泛的组织学亚型是小细胞肺癌（SCLC）和非小细胞肺癌（NSCLC），其中小细胞肺癌占15％的病例，非小细胞肺癌占85％的病例，其中包括腺癌，鳞状细胞癌和大细胞癌。尽管由于NSCLC和SCLC具有独特的生物学和基因组异常而通常被认为是不同的疾病，但这些恶性疾病可能共享共同的起源细胞这一观点已得到支持。当对EGFR酪氨酸激酶抑制剂产生抗药性时，具有突变的EGFR的一部分NSCLC返回SCLC，这一出乎意料的发现支持了这一想法。此外，其他案例报告也描述了NSCLC和SCLC的共存，进一步挑战了人们普遍接受的关于其不同血统的观点。研究人员总结了已发表的临床观察结果和生物学基础，其结合了SCLC和NSCLC组织学以及从腺癌转变为SCLC的癌症。研究人员还讨论了针对常见潜在起源细胞的临床前研究，并推测了每种疾病的基因组学如何确定不同的分化途径。

应激诱导的EGFR贩运：机制，功能和治疗意义

表皮生长因子受体（EGFR）在正常生理和癌症中具有基本作用，使其成为癌症治疗的合理靶标。然而，令人惊讶的是，已经证明靶向经典的，配体刺激的EGFR信号转导的抑制剂在治疗许多EGFR依赖性癌症中非常无效。最近的证据表明，内源性和治疗诱导的细胞应激均可触发不依赖配体的EGFR转运和信号传导的健壮，非规范性途径，从而为癌细胞提供生存优势和对治疗的抵抗力。研究人员回顾了非规范EGFR交易和信号传导的机制调节，以及激活它的病理和治疗压力。研究人员还讨论了该途径在EGFR过表达癌症的临床治疗中的意义。

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Reference

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Oser MG, Niederst MJ, Sequist LV, Engelman JA. Transformation from non-small-cell lung cancer to small-cell lung cancer: molecular drivers and cells of origin. Lancet Oncol. 2015;16(4):e165-e172. doi:10.1016/S1470-2045(14)71180-5

Tan X, Lambert P F, Rapraeger A C, et al. Stress-Induced EGFR Trafficking: Mechanisms, Functions, and Therapeutic Implications.[J]. Trends in Cell Biology, 2016, 26(5): 352-366.

基因敲除切割效率不仅可以让人具有生成蛋白基化谱和建立调控记录的能力，而且具有多种优势，是一种特别有吸引力的重组蛋白表达系统。首先，它在谷氨酸上羧基化，在酪氨酸上硫酸化。第二，操作简单，通过瞬时基因表达可以快速产生重组蛋白。第三，可用于稳定的重组蛋白生产。一些研究人员利用基因细胞敲除切割效率系统产生基因编辑细胞系，对GLUL基因组位点进行靶向测序，产生了EPO的稳转细胞系，并发现重组促红细胞生成素在人体内稳定表达的机制。

根据科研需求，结合靶基因的情况进行基因稳转敲除方案设计

方案1：小片段基因敲除方案，gRNA设在外显子2两端的内含子中，敲除外显子编码碱基数为非3倍数，敲除后可造成移码。

方案2：移码基因敲除方案，gRNA设在外显子上，缺失的碱基数为非3倍数，敲除后可发生移码突变。

方案3：大片段基因敲除方案，将整个基因的编码序列敲除，达到大片段敲除的效果。

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